細胞培養芯片-BE-GRADIENT

概述

BE-GRADIENT是一種在仿生條件下用于細胞培養的多功 能微流控芯片。它允許在化學梯度下進行細胞培養。所使用聚合物材料的光學透明度使得使用相差、熒光和共聚焦顯微鏡來監測實驗成為可能。 典型應用實例有細胞/球體的侵襲和遷移、新陳代謝、血管 生成、趨化、局部缺血、細胞分化或氧化應激。

材質

BE-GRADIENT芯片由生物相容性材料制成，且氣體不滲 透，可以有效地梯度控制CO2、O2等。具有良好的光學性能， 具有高透明度和低自熒光。

技術特點

產品經過消毒(每盒10片)。常溫(15-25℃)下，避免陽光直射，干燥處 存放。

細胞培養涂層

BE-GRADIENT芯片經過處理，表面親水，便于用水溶液和/或凝膠填 充，以促進細胞粘附。

如果需要特定包被涂層，根據廠家說明準備涂層溶液(Collagen I, Collagen IV, Fibronectin, Poly-L-Lysine, Poly-D-Lysine…)并應用到每個通道。 吸出涂層溶液，使用通道體積5-10倍的蒸餾水或PBS洗滌，去除多余的涂層溶液。

填充和處理

1. 從指定的入口填充通道，確保流動方向與箭頭(A)指示的方向 一致。

2. 為了更好的應用芯片，腔室內應保持完全干燥(B)。

3. 用P-100移液管取30 ~ 50μL溶液。建議在中央通道中使用帶有 細胞的水凝膠溶液，將微型移液管的尖端插入中央通道入口。

4. 慢慢按壓移液管活塞將溶液注入芯片(C, D)。首先，彎液面進 入腔體(E, F)。繼續注入，直到中心通道完全被填滿(G, H)。

5. 在中央通道入口和出口滴入培養液，以避免過程中蒸發。 如果是3D細胞培養，建議每10-15秒翻轉芯片2-3分鐘，以獲得 均勻的細胞分布，防止細胞沉降在芯片底部。然后將芯片置于 37ºC培養箱中孵育30分鐘或待凝膠聚合完成。 如果是2D細胞培養，在填充側通道之前，保證細胞附著在表面 (必要條件下)。所需時間因細胞類型而異。 一旦中央通道填充滿，按照以下步驟處理外側通道:

6. 用P-100或P-1000移液管取200 μL的培養液加到同側的儲液池中。 培養液流過通道，到達出口儲液池。注意把一側儲液池填滿， 并保持同一通道另一側的儲液池空著。在培養液體積相同的兩 個儲液池中，流量是相等的?？梢杂脫u桿控制把培養液從一個 儲液池移到另一個儲液池。當每個儲液池的最終體積為100 μl 時，可以采用45°傾角。

7. 如果將芯片連接到流體控制系統，那么使用毛細管連接通道入 口和出口。入口和出口均連接到外徑2.4 mm的毛細管上。注意， 在使用流體控制系統之前，芯片和毛細管內須充滿培養液。 連接毛細管后，系統完全封閉，可以從儲液池中取出培養液。

注意：為防止過程中產生氣泡，請避免將移液管尖端完全倒空。當從吸液口移開 移液管時，緊緊握住柱塞，以免負壓將溶液吸走。 流體控制系統的配置 Beonchip對流體控制系統的配置提出了一些建議。 前處理: 1. 在培養箱中預熱毛細管和流體控制元件15-20分鐘。

流體控制系統的配置

Beonchip對流體控制系統的配置提出了一些建議。 前處理: 1. 在培養箱中預熱毛細管和流體控制元件15-20分鐘。

2. 將系統放置在超凈臺中。

3. 在安裝流體控制系統之前，細胞須良好地粘附在表面。

4. 芯片內部或入口/出口填充滿培養液。

組裝流體控制系統，需考慮以下事項:

1. 將入口完全填滿培養液，防止有氣泡殘留。

2. 在組裝系統之前，先將連接到入口的毛細管準備好。

3. 入口和出口都連接外徑2.4 mm的接頭。當系統準備好，將接頭連 接在進口。過程中須非常小心，以確保沒有氣泡進入系統。

4. 將毛細管連接到出口，封閉系統。

5. 檢查系統是否有泄漏。在將系統放入生物反應柜或培養箱之前， 讓泵運行幾分鐘。

細胞接種

為了在3D環境中培養，需要制備含有細胞的水凝膠混合物。 下面的參考文獻詳細介紹了BE-GRADIENT芯片的接種協議： 1. chip: Generating pseudopalisades and enhancing aggressiveness through blood vessel obstruction events. Neuro Oncol 19 (4): 503-513. doi: 10.1093/neuonc/now230 2. Ayuso JM, Virumbrales-Muñoz M, Lacueva A, Lanuza PM, ChecaChavarria E, Botella P. et al. (2016) Development and characterization of a microfluidic model of the tumour microenvironment. Sci. Rep. 6, 36086; doi: 10.1038/srep36086 (2016) 3. Ayuso JM, Basheer HA, Monge R, Sánchez-Álvarez P, Doblaré M, Shnyder SD, et al. (2015) Study of the Chemotactic Response of Multicellular Spheroids in a Microfluidic Device. PLoS ONE 10(10): e0139515. doi:10.1371/journal.pone.0139515

細胞顯微觀察的準備

可監測固定的或活的細胞和化學梯度。傳統細胞培養中使用的大多數 監測系統都可以用于BEONCHIP微流控芯片。常用的固定物也可用。細胞活力可以用不同的染料來評估。此外，免疫熒光染色可識別特異性靶點。 細胞周期熒光記錄儀也可以使用。

其他讀數

可以復蘇細胞，以便進行下游應用，如流式細胞，RNA提取(PCR)… 欲了解更多信息，請聯系BEC